神经

克隆测序方法检测三核苷酸重复次数的可靠性

作者:史源 整理 来源:医学论坛网 日期:2013-01-04
导读

         近来,福建医科大学附属第一医院神经内科郑巧娟、甘世锐、王柠等共同发表文章,旨在探讨克隆测序技术用于检测三核苷酸(CAG)重复次数的可靠性。研究表明,克隆测序检测CAG重复次数会造成重复次数变异,且存在各种碱基变异。因此不宜单用TA克隆测序检测CAG重复次数及筛查碱基变异,需联合应用多种方法以提高结果的可靠性。该文发表在《中华神经科杂志》2010年43卷09期。

  近来,福建医科大学附属第一医院神经内科郑巧娟、甘世锐、王柠等共同发表文章,旨在探讨克隆测序技术用于检测三核苷酸(CAG)重复次数的可靠性。研究表明,克隆测序检测CAG重复次数会造成重复次数变异,且存在各种碱基变异。因此不宜单用TA克隆测序检测CAG重复次数及筛查碱基变异,需联合应用多种方法以提高结果的可靠性。该文发表在《中华神经科杂志》2010年43卷09期。

  研究对1例临床确诊的遗传性脊髓小脑性共济失调1型(SCA1)患者,PCR法扩增ATXN1基因的CAG重复次数,8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(DPAGE)分离PCR产物以协助确诊。2.5%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物的大小片段,割胶回收大小片段测序。另外将割胶回收的大片段进行TA克隆测序。

  DPAGE提示大片段存在CAG的异常扩增,故该患者可确诊为SCA1。PCR产物大小片段直接测序结果为:小片段为26次CAG重复,大片段为47次重复。而将大片段克隆测序后,则有50、47、46、41、32、28、27、26、25及24次共10种不同的CAG重复次数,而且出现了CCG、CGG、CTG、CAA、TAT等序列变异现象。

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